
時間:2020-07-20 17:40:00 瀏覽:4276次
(a) MTT;
MTT為黃色化合物,是一種接受氫離子的染料?;罴毎阽晁崦摎涿负图毎?/span>c的作用下四唑環開裂,生成藍色的甲月替結晶并沉積在細胞中,甲月替結晶的生成量僅僅與活細胞數目成正比(死細胞中的琥珀酸脫氫酶消失,不能還原MTT)。還原生成的甲月替結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺、20%的十二甲基磺酸鈉(PH 4.7)或10%酸化十二甲基磺酸鈉(PH 4.7)的溶液中溶解。利用酶標儀測定490nm波長處的光密度測出OD值,即反映活細胞數目。也可利用DMSO(二甲基亞砜)來溶解。用DMSO之前要盡量去掉培養液,一遍DMSO溶解甲月替顆粒,進行比色測定。
1.取96孔細胞培養板,每孔中加0.1ml含2×104~10×104靶細胞的培養液(含10%小牛血清的RPMI-1640培養液),在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養2~3小時讓細胞帖壁(如果是懸浮細胞可直接進行下一步)
2.用RPMI-1640培養液2~10倍遞次稀釋細胞因子標準品,根據情況2~5倍遞次稀釋待檢樣品,每孔加0.1ml稀釋的標準品和待檢樣品,每個稀釋度3個重復孔。對照孔6個:3個陽性對照孔,每孔加0.1ml含大劑量細胞因子的RPMI-1640培養液,3個陰性對照孔,每孔加0.1ml RPMI-1640培養液。在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養24~48小時或預定的時間。
3.吸去培養液,用PBS洗滌一次(如為懸浮細胞,應在吸去上清液前離心培養板)。
4.每孔加0.1ml PBS和10μl MTT染液,在37℃ 5% CO2的飽和水汽二氧化碳培養箱中培養4~6小時。
5.每孔加0.1ml酸化異丙醇,也可用含10% SDS的10mmol/L HCl代替酸化異丙醇,在振蕩器上振蕩混勻,讓還原產物充分溶解。置酶聯檢測儀上測定光密度(OD)值,檢測波長570nm,參考波長630nm。以OD值對樣品稀釋度作圖,比較標準曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細胞因子的含量。
(b) CCK-8檢測細胞增殖(活力):
CCK-8(cell-counting kit-8)檢測試劑盒是應用WST-8取代MTT被還原,WST-8是一種類似于MTT的化合物,在電子耦合試劑存在的情況下,可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan。WST-8產生的formazan比XTT和MTS產生的formazan更易溶解。且WST-8相較XTT和MTS化學性狀更穩定, 因此實驗結果相對更加穩定。此外,WST-8相較MTT、XTT,線性范圍相對寬,靈敏度更高。
當細胞增殖得越多越快,則formazan產生量越多,顏色越深;反之,當內外因造成的細胞毒性越大,則顏色越淺。對于同樣的細胞,顏色的深淺和細胞數目呈線性關系。應用酶標儀測定吸光值并進行統計學計算便可以獲得細胞增殖(活性)相關數據。
(c) XTT:
化學名:2,3- bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino)carbonyl]
-2H-tetrazolium hydroxide,作為線粒體脫氫酶的作用底物,被活細胞還原成水溶性的橙黃色產物。當XTT與電子偶合劑(例如PMS)聯合應用時,其所產生的水溶性的產物的吸光度與活細胞的數量成正比。用XTT代替MTT可省去溶解還原產物結晶的步驟,XTT可以被活細胞中的代謝酶還原成黃色水溶性的代謝產物(formazan)。代謝產物在OD450處有吸收峰。優點:1、使用方便,省去了洗滌細胞;2、檢測快速;3、靈敏度高,甚至可以測定較低細胞密度;4、重復性優于MTT。 缺點:XTT水溶液不穩定,需要低溫保存或現配現用。
二、應用范圍
生物活性因子的活性檢測;
大規模的抗腫瘤藥物篩選;
細胞增殖實驗;
藥物或基因導致的細胞毒性試驗;
藥敏試驗等。
三、服務周期
15-25個工作日
四、服務流程
威斯騰生物服務項目
分子生物學檢測 | 蛋白質與免疫學 | 動物實驗 |
實時熒光定量PCR | 單克隆抗體制備 | 帕金森疾病模型 |
免疫共沉淀(Co-IP) | 多克隆抗體制備 | 抑郁癥動物模型 |
ELISA(酶聯免疫吸附法)技術 | Western-blot 實驗服務 | 脊髓損傷模型 |
生化指標檢測 | 蛋白雙向電泳實驗服務 | 腦外損傷模型 |
雙熒光素酶報告基因檢測 | 原核蛋白表達純化 | 骨神經損傷模型 |
染色質免疫共沉淀(ChIP) | 真核蛋白表達純化 | 心肌缺血模型 |
GST pull Down | ITRAQ定量蛋白質組學 | 心力衰竭模型 |
SLAC蛋白組學 | 肺動脈高血壓動物模型 | |
高血壓模型 | ||
病毒包裝純化 | 實驗課題整體外包 | 粥樣動脈硬化模型 |
過表達/干擾慢病毒包裝純化 | 整體課題外包 | 大腦中動脈阻塞模型 |
過表達/干擾腺病毒包裝純化 | 細胞整體實驗外包 | 慢性之氣管炎模型 |
逆轉錄病毒包裝純化 | 動物整體實驗外包 | 過敏性哮喘模型 |
腺相關病毒包裝純化 | 肺炎大鼠模型 | |
肝炎-肝硬化-肝癌模型 | ||
蛋白芯片 | 原代細胞培養 | 肝纖維化模型 |
細胞因子芯片 | 骨髓間充質干細胞培養 | 膽結石模型 |
生長因子芯片 | 脂肪干細胞培養 | 急性胰腺炎模型 |
信號通路磷酸化水平檢測芯片 | 心肌成纖維細胞培養 | 急性腎衰竭模型 |
BioPlex懸浮芯片 | 軟骨細胞培養 | 體內血栓模型 |
生長因子芯片 | 血管內皮細胞培養 | 關節炎模型 |
炎癥因子芯片 | 神經元細胞培養 | I型和II型糖尿病模型 |
血管生成因子芯片 | 內皮組細胞原代培養 | 裸鼠成瘤 |
凋亡因子芯片 | 基因編輯動物 | |
趨化因子芯片 | 電生理相關服務 | 動物整體實驗服務 |
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片 | 膜片鉗實驗 | |
細胞生物學 | 高通量測序 | 代謝組學 |
細胞原代培養 | mRNA測序 | 氣相色譜GC/MS |
MTT檢測 | LncRNA測序 | 液相色譜LC/MS |
細胞凋亡檢測 | 全基因組測序 | 核磁共震NMR |
細胞周期檢測 | RNA-Seq測序 | |
細胞克隆形成實驗 | 外顯子測序 | 影像學相關實驗 |
Transwell細胞遷移/侵襲 | 16s擴增子測序 | Micro-CT |
流式分選 | Small RNA測序 | 小動物活體成像 |
CCK8/XTT檢測 | 宏基因組測序 | 核磁共振 |
臺盼藍檢測細胞活性 | 單細胞測序 | PET-CT |
藥物篩選細胞學實驗 | circleRNA測序 | |
細胞粘附性檢測 | 甲基化測序 | 基因編輯動物 |
細胞劃痕實驗 | 條件性敲除小鼠/大鼠 | |
細胞生物學整體實驗 | 全基因敲除小鼠/大鼠 | |
細胞成管實驗 | ||
病理學檢測 | CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入 | 基因芯片 |
掃描電鏡 | 基因定點突變細胞系 | LncRNA芯片 |
透射電鏡 | 單基因敲除細胞系 | miRNA芯片 |
HE染色 | 多基因敲除細胞系 | mRNA芯片 |
免疫組化 | 目的基因敲入細胞系 | 甲基化芯片(限人和小鼠來源樣本) |
Tunel(原位末端凋亡法)檢測 | 報告基因敲入細胞系 | SNP芯片(限人和小鼠來源樣本) |
激光共聚焦 | miRNA/LncRNA敲除細胞系 | |
免疫熒光 | ||
Masson染色 | CRISPR/Cas9動物敲除/敲入 |
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原位雜交 | 基因敲除大鼠/小鼠 |
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熒光原位雜交 | 基因敲入大鼠/小鼠 | |
特殊染色(PSA、茜素紅、阿爾新藍等) |
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行為學檢測 | 藥物篩選服務項目 | 藥效學評價 |
水迷宮實驗 | 高通量自動藥物篩選平臺 | 神經系統藥物藥效學評價 |
曠場實驗 | 細胞高內涵藥物篩選平臺 | 抗腫瘤藥物藥效學評價 |
重復性刻板行為檢測 | 蛋白質組學靶標研發平臺 | 心血管系統藥物藥效學評價 |
動物跑臺檢測 | 分子藥理研究平臺 | 泌尿系統藥物藥效學評價 |
強迫游泳 | 生物膜片鉗藥物篩選平臺 | 內分泌系統藥物藥效學評價 |
常規藥物體外篩選 | 抗炎免疫藥物藥效學評價 |
【本平臺合作項目】
分子生物學、細胞生物學、病理染色檢測、細胞敲除&敲入、模式與轉基因動物、SPF動物保種、免疫學檢測、影像學檢測、原代培養、細胞藥篩、CRISPR/Cas9基因編輯、基因芯片、高通量測序、蛋白組學、代謝組學、高通量高內涵篩選、藥效學評價、藥理毒理學實驗、慢病毒包裝與穩轉株建立、SiRNA與納米載藥、ChIP、CO-IP、生物信息學分析、知識產權服務!
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