威斯騰生物經過10多年的發展，獲得了上百種細胞株和四十余種原代細胞培養經驗，并建立了龐大的細胞庫及原代培養資料庫。細胞平臺有資深實驗員、規范的SOP操作文件，萬級凈化細胞房，這些條件為保質保量完成每個客戶的實驗提供了保障。 同時，威斯騰生物結合多年原代及傳代細胞培養經驗，結合平臺已有的技術優勢，建立了完善的體外藥篩實驗，并引進RTCA(Real-time cellular Analysis，實時無標記細胞記錄儀），在藥篩過程中，全程實時記錄細胞真實狀況，為藥篩提供最真實精準的實驗數據。

無菌操作注意事項

細胞培養一定要保持工作區的無菌清潔，先用紫外燈和臭氧殺菌1h，然后通風30min，操作前需要換細胞間專用拖鞋，雙手帶上一次性橡膠手套并用75%乙醇消毒，穿上實驗服，戴上一次性口罩和帽子，操作時不能大聲說話，整個無菌操作都應該在酒精燈的周圍進行。

小鼠海馬神經元細胞的原代分離培養

1、培養板的包被

用0.01%的 L-多聚賴氨酸溶液包被培養板和小玻片，37℃恒溫孵育 4h 或常溫過夜。

吸棄 L-多聚賴氨酸溶液，滅菌去離子水漂洗培養孔及小玻片，晾干備用。

2、小鼠海馬神經元細胞的分離及培養

（1）75%（體積分數）酒精消毒新生24h內的健康C57小鼠，在無菌條件下脫頸處死，剪開頭皮及顱骨，取出腦組織，置于盛冷的pH7.2，無鈣、鎂的D-Hank's液的平皿中（下置冰袋）。

（2）無菌分離海馬組織。保持腦組織背面朝上，在鏡下小心翻開大腦皮質，暴露海馬，用眼科剪或尖鑷分離海馬周圍組織，取出放入盛有D-Hank's液的平皿中。

（3）用虹膜剪將組織剪切成1mm3左右的組織塊，0.125%胰蛋白酶消化，37℃作用 20min，期間振搖 2~3 次。

（4）棄去上清液，加入完全接種液終止消化，漂洗2次。巴斯德吸管輕輕吹打 20次，制成細胞懸液，靜置 2min。

（5）懸液收集于新的離心管，離心（1000rpm，10 min，4℃），棄去上清液。加入完全培養液重懸，200 目不銹鋼網過濾。

（6）將濾液進行臺盼藍拒染試驗,血細胞計數板鏡下計數。以 8.0 ×104至 1.0 ×105/mL的密度將細胞以400μL/孔接種到預先用L-多聚賴氨酸包被的24孔培養板或 100μL/孔接種 96 孔培養板。

（7）置 37℃、5%CO2培養箱培養 4-6h，全量更換為無血清培養液。

（8）體外培養第3d，加入Ara-C-工作液，以抑制非神經細胞過度增殖，作用 24 h后吸出。

（9）此后每 3d半量換液1次 , 體外培養第 7～21d的細胞用于實驗。

大鼠脊髓神經元細胞的分離及培養

1、培養板的包被

（1）將蓋玻片裁成 0.5cm×0.5cm 大小，洗潔精浸洗、烘干。

（2）經 5%鹽酸浸泡30min，自來水沖洗20min，三蒸水沖洗，浸泡過夜并烘干；移入 95%酒精浸泡保存。用前酒精燈烤干，放入 24 孔細胞培養板。

（3）用 0.01%的 L-多聚賴氨酸溶液包被培養皿和小玻片，37℃恒溫孵育 4h 或常溫過夜。

吸棄 L-多聚賴氨酸溶液，滅菌去離子水漂洗培養孔及小玻片，晾干備用。

2、大鼠脊髓神經元細胞的分離及培養

(1) 75%（體積分數）酒精消毒新生 24h 內的健康SD大鼠，在無菌條件下斷頭，分離并切取脊髓，置于盛冷的pH7.2,無鈣、鎂的D-Hank's液的平皿中（下置冰袋）。

(2) 無菌條件下仔細剝離脊膜及血管。

(3) 用虹膜剪將組織剪切成 1mm3左右的組織塊，0.125%胰蛋白酶消化，37℃作用 10min，期間振搖 2~3 次。

（4）巴斯德吸管輕輕吹打 20次，靜置 5min，將細胞上清移入新的無菌離心管，加入完全接種液終止消化。剩余組織按照上述步驟繼續消化，重復2-3次，制成細胞懸液。

（5）將新的離心管中細胞懸液，離心（1000r/min，10 min，4℃），棄去上清液。加入完全培養液重懸，200 目不銹鋼網過濾。

（6）將濾液進行臺盼藍拒染試驗,血細胞計數板鏡下計數。以 8.0 ×104至 1.0 ×105/mL的密度將細胞以 400μl/孔接種到預先用L-多聚賴氨酸包被的24 孔培養板

（7）置 37℃、5%CO2培養箱培養 4～6h，全量更換為無血清培養液。

（8）體外培養第 3天，加入Ara-C 工作液，以抑制非神經細胞過度增殖，作用 24 h后吸出。

(9) 此后每 3d半量換液1次 , 體外培養第 7～21天的細胞用于實驗。

威斯騰實驗服務流程

威斯騰生物服務項目

分子生物學類	蛋白質與免疫學	動物實驗
實時熒光定量PCR	單克隆抗體制備	帕金森疾病模型
免疫共沉淀（Co-IP）	多克隆抗體制備	抑郁癥動物模型
ELISA（酶聯免疫吸附法）技術	Western-blot 實驗服務	脊髓損傷模型
生化指標檢測	蛋白雙向電泳實驗服務	腦外損傷模型
雙熒光素酶報告基因檢測	原核蛋白表達純化	骨神經損傷模型
染色質免疫共沉淀（ChIP）	真核蛋白表達純化	心肌缺血模型
GST pull Down	ITRAQ定量蛋白質組學	心力衰竭模型
	SLAC蛋白組學	肺動脈高血壓動物模型
		高血壓模型
病毒類	實驗課題整體外包	粥樣動脈硬化模型
過表達/干擾慢病毒包裝純化	整體課題外包	大腦中動脈阻塞模型
過表達/干擾腺病毒包裝純化	細胞整體實驗外包	慢性之氣管炎模型
逆轉錄病毒包裝純化	動物整體實驗外包	過敏性哮喘模型
腺相關病毒包裝純化		肺炎大鼠模型
		肝炎-肝硬化-肝癌模型
蛋白芯片	原代細胞培養	肝纖維化模型
細胞因子芯片	骨髓間充質干細胞培養	膽結石模型
生長因子芯片	脂肪干細胞培養	急性胰腺炎模型
信號通路磷酸化水平檢測芯片	心肌成纖維細胞培養	急性腎衰竭模型
BioPlex懸浮芯片	軟骨細胞培養	體內血栓模型
生長因子芯片	血管內皮細胞培養	關節炎模型
炎癥因子芯片	神經元細胞培養	I型和II型糖尿病模型
血管生成因子芯片	內皮組細胞原代培養	裸鼠成瘤
凋亡因子芯片		基因編輯動物
趨化因子芯片	電生理相關服務	動物整體實驗服務
HuProt TM 20K人類蛋白組芯片	膜片鉗實驗
細胞生物學	高通量測序	代謝組學
細胞原代培養	mRNA測序	氣相色譜GC/MS
MTT檢測	LncRNA測序	液相色譜LC/MS
細胞凋亡檢測	全基因組測序	核磁共震NMR
細胞周期檢測	RNA-Seq測序
細胞克隆形成實驗	外顯子測序	影像學相關實驗
Transwell細胞遷移/侵襲	16s擴增子測序	Micro-CT
流式分選	Small RNA測序	小動物活體成像
CCK8/XTT檢測	宏基因組測序	核磁共振
臺盼藍檢測細胞活性	單細胞測序	PET-CT
藥物篩選細胞學實驗	circleRNA測序
細胞粘附性檢測	甲基化測序	基因編輯動物
細胞劃痕實驗		條件性敲除小鼠/大鼠
細胞生物學整體實驗		全基因敲除小鼠/大鼠
細胞成管實驗
病理類	CRISPR/Cas9細胞敲除/敲入	基因芯片
掃描電鏡	基因定點突變細胞系	LncRNA芯片
透射電鏡	單基因敲除細胞系	miRNA芯片
HE染色	多基因敲除細胞系	mRNA芯片
免疫組化	目的基因敲入細胞系	甲基化芯片（限人和小鼠來源樣本）
Tunel（原位末端凋亡法）檢測	報告基因敲入細胞系	SNP芯片（限人和小鼠來源樣本）
激光共聚焦	miRNA/LncRNA敲除細胞系
免疫熒光
Masson染色	CRISPR/Cas9動物敲除/敲入
原位雜交	基因敲除大鼠/小鼠
熒光原位雜交	基因敲入大鼠/小鼠
特殊染色（PSA、茜素紅、阿爾新藍等）
行為學檢測	藥物篩選服務項目	藥效學評價
水迷宮實驗	高通量自動藥物篩選平臺	神經系統藥物藥效學評價
曠場實驗	細胞高內涵藥物篩選平臺	抗腫瘤藥物藥效學評價
重復性刻板行為檢測	蛋白質組學靶標研發平臺	心血管系統藥物藥效學評價
動物跑臺檢測	分子藥理研究平臺	泌尿系統藥物藥效學評價
強迫游泳	生物膜片鉗藥物篩選平臺	內分泌系統藥物藥效學評價
	常規藥物體外篩選	抗炎免疫藥物藥效學評價

【本平臺合作項目】